聊聊細胞分離和培養(yǎng)那些事兒
轉(zhuǎn)自生物在線 ?來源： 北京索萊寶科技有限公司???2019-9-2
細胞培養(yǎng)是生命科學(xué)研究的重要方法之一。同時，在原代細胞培養(yǎng)的過程中，首要任務(wù)是從組織中分離細胞。但看似簡單的細胞分離和培養(yǎng)技術(shù)，卻不知難倒了多少英雄好漢。下面索萊寶和大家聊聊細胞分離與培養(yǎng)那些事兒。
如何分離細胞？? ?
從原代組織中分離細胞，將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，常用的是機械解離細胞法、酶學(xué)解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。然而，為了更好地測定細胞免疫功能，我們需要從動物外周血或組織中獲取有活性的細胞，如淋巴細胞、單核細胞、粒細胞等。分離這類免疫細胞的方法有：密度梯度離心法、黏附分離法、流式細胞儀分離法等其他分離法。目前常用的是密度梯度離心法。索萊寶細胞分離液產(chǎn)品的研發(fā)原理就是基于不同細胞的密度差異，通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布。
具體怎么實現(xiàn)呢？?
以分離人外周血淋巴細胞為例：
- 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
- 在離心管中加入適量分離液，將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。
- 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min。
- 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。
- 小心地吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。
- 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。
- 重復(fù)步驟6。
- 棄上清，細胞重懸備用
細胞分離時別忘了做到這些！
無菌操作：在樣品收集和分離過程中，應(yīng)注意無菌操作，避免微生物污染。
保證新鮮：血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），避免冷凍和冷藏，優(yōu)抗凝劑選擇為EDTA、枸櫞酸和肝素。
分離液的保存：分離液使用時應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。
細胞稀釋及細胞洗滌液：稀釋或洗滌細胞不可使用含鈣離子、鎂離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。
注意添加順序：樣品在上，分離液在下，保持兩液面界面清晰。
離心管：選用玻璃材質(zhì)離心管。部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細胞掛壁，影響分離效果。
離心：血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索分離條件。
如何選擇細胞分離液產(chǎn)品？
1. 要有針對性地選擇產(chǎn)品。不同細胞的密度與體積是不同的，不同種屬動物細胞的密度也是不同的。索萊寶針對不同客戶科研需求，研發(fā)了不同種細胞的分離液，如：淋巴細胞分離液、粒細胞分離液、白細胞分離液和單個核細胞分離液；針對不同種屬動物，研發(fā)了不同動物的細胞分離液，如：人、小鼠、大鼠、雞、兔、牛、狗等等。同時，索萊寶細胞分離液系列產(chǎn)品滿足了外周血、組織臟器、骨髓等不同樣品的分離。索萊寶豐富多樣的產(chǎn)品滿足了客戶的多種科研需求。
2. 要選擇分層效果明顯的產(chǎn)品。索萊寶細胞分離液產(chǎn)品，性價比高，分層效果明顯。以人外周血淋巴細胞分離液為例，索萊寶分離液產(chǎn)品分離的白膜層非常清晰，而且白膜層沒有彌散，效果優(yōu)于其他品牌同類產(chǎn)品。
| 索萊寶相關(guān)產(chǎn)品 | |
| P8610 | 人外周血淋巴細胞分離液 |
千辛萬苦得到的細胞
以為大功告成？
接下來是細胞培養(yǎng)
萬里長征才剛剛開始
稍不注意
一下回到解放前！
細胞培養(yǎng)要注意哪些？
無菌的環(huán)境與操作：在細胞培養(yǎng)的過程中，應(yīng)保持無菌的實驗環(huán)境并進行無菌操作。
培養(yǎng)液的選擇：每種細胞應(yīng)該選擇適合它的培養(yǎng)液。索萊寶的多種細胞培養(yǎng)液產(chǎn)品滿足了不同細胞的需求。
溫度與pH值的監(jiān)控：一般選擇37℃和5% CO2培養(yǎng)體系。細胞培養(yǎng)液偏黃色的時候應(yīng)及時更換培養(yǎng)液。
預(yù)熱培養(yǎng)液：為了使細胞更好地貼壁，應(yīng)注意提前預(yù)熱培養(yǎng)液。
避免培養(yǎng)液暴露在熒光下：平時應(yīng)注意將培養(yǎng)液儲存在黑暗的環(huán)境中，熒光（紫外光）對于培養(yǎng)液（有細胞或無細胞）有不利影響。
傳代接種密度：在細胞傳代的過程中要保證合適的接種密度。通過細胞計數(shù)來控制細胞傳代的接種密度。同時，要注意觀察細胞的狀態(tài)和生長速度。
避免細胞損傷：在細胞消化傳代時，應(yīng)注意胰蛋白酶的濃度以及消化的時間。輕柔地吹打細胞，避免機械損傷，選擇適當?shù)碾x心力。
細胞凍存與復(fù)蘇：凍存液中要加入保護劑：甘油或二甲基亞砜（DMSO）。凍存時要進行梯度降溫。細胞復(fù)蘇選擇在37℃的水溶液中進行，解凍細胞速度要快。解凍后，細胞凍存管外壁要用紙擦干，避免污染。
| 精選索萊寶相關(guān)產(chǎn)品 | |
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
| 11011-8611 | 優(yōu)級胎牛血清 (無噬菌體低內(nèi)毒素) |
| T1300 | 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚紅 |
| P1400 | 青鏈霉素混合液(100×)細胞培養(yǎng)專用 |
| 31600 | DMEM(低糖，含雙抗) |
| 11965 | DMEM 高糖，含L-谷氨酰胺、酚紅，不含丙酮酸鈉、HEPES |
| D8371 | 二甲基亞砜 DMSO (細胞培養(yǎng)級) |
感恩有你，真情回饋。索萊寶為答謝廣大客戶的支持，2019.7.1-8.15期間進行細胞分離液買二送一活動！助力科研，品質(zhì)值得信賴！心動不如行動，機會千載難逢，還不快快下單！
總得來說
細胞分離和培養(yǎng)是個細致活
方方面面都需您注意
希望這些要點可以幫助到您！
索萊寶愿陪在您身邊，助您成功！
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